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睾丸精子冷冻复苏对icsi助孕过程

1.研究对象及分组:选取2010年1月至2014年9月在生殖中心因男方梗阻性无精子症行icsi助孕者,共214个周期,其中采用冷冻复苏睾丸精子行icsi助孕107个周期(冻精复苏组),采用新鲜睾丸精子行icsi助孕107个周期(新鲜精子组)。纳入标准:第1周期行icsi治疗、长方案超排卵、夫妇双方染色体核型分析均正常者。排除标准:女方子宫内膜异位症、子宫肌瘤、子宫畸形、卵巢功能衰竭等。梗阻性无精子症确诊依据:至少3次射出精液离心沉淀后未见精子,诊断性睾丸活检可见成熟精子。

2.睾丸穿刺取精:常规消毒铺巾,利多卡因局部麻醉,用带侧孔的睾丸穿刺针经皮睾丸穿刺,稍拔出针芯,挤压睾丸,再插入针芯,然后连穿刺针一起拔出,从穿刺针侧孔挑出睾丸组织,置于含10%人血清白蛋白的人输卵管培养液中,用2只1ml注射器针头划破曲细精管,倒置显微镜下观察,吹打混匀后直接离心处理。

3.精子冷冻:精子冷冻保护剂置室温平衡30min;将经处理后含有精子的悬液与精子冷冻保护剂以1:1比例混匀,移入精子保存管进行分装,室温平衡10min;悬吊于液氮罐内距液氮面5cm,10min后将精子保存管放入液氮长期保存。

4.精子复苏:从液氮中取出保存精液的冷冻管,在室温中放置30min;加入等量含10%sss的HtF培养液,混匀后进行洗涤离心;最后在沉淀物中加入含10%sss的HtF培养液混匀待用。

5.卵母细胞获取、icsi及胚胎移植:超促排卵均采用黄体中期启动的长方案,当直径≥20mm的卵泡≥2个时,注射HcG10000U,36H后行阴道B超引导下穿刺取卵术。取卵后4~6H选取成熟卵母细胞(mii期)行icsi操作。取卵后第3天选择最优的1~3枚胚胎移植。

6.判断指标:正常受精:icsi后16~17H观察受精情况,以双原核为正常受精;卵裂率:icsi后40~41H观察卵裂情况,并计算卵裂球比例;优质胚胎:以卵裂球大小均匀,细胞饱满,碎片<5%的i级胚胎和碎片≤20%的Ⅱ级胚胎为优质胚胎;可利用胚胎:所有移植及冷冻的胚胎;临床妊娠:移植后14D查血β-HcG,确定是否生化妊娠,若为阳性,2周后B超检查提示宫腔内或宫外见孕囊及胎心搏动者为临床妊娠。

7.统计学分析:采用sPss13.0软件进行数据分析,结果以均数±标准差(珚x±s)表示,组间比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

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