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外周血单个核细胞分离及冷冻保存

细胞分离:

外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml,平均分至50ml离心管中,931×g,离心8min,吸取上层血浆至50ml离心管中,取1.5ml于EP管中,标记,-80℃保存NA稀释血细胞,使得血细胞:NA为11,混匀后均匀缓慢地加至相应的A液上层,形成完整的界面。596×g,离心20min。可见明显分层。吸弃第1层上清,小心轻柔地将第2层的白色细胞层分别吸至不同的洁净50ml离心管中。分别向各管中加NA,稀释混匀,定容至40ml/管。931×g,离心8min。吸弃上清,加NA重悬细胞。冻存处理前留取细胞悬液计数和活力测定。

细胞冷冻保存

纯化后细胞重悬于含终浓度9.8%的等体积DMSO2ml和右旋糖苷的冷冻保存液中,冷冻保护液配置成2组1组含80%的无血清培养液,另1组含80%自体血浆轻轻混匀后置-20℃冰箱冷却平衡5-15min到4℃以下,同时把冻存管放4℃冰箱平衡15min。分装入2ml冻存管内,每管1ml,管壁做好标识。放在样本冻存盒,转移至程序降温盒仪器,最终将细胞保存于-196℃液氮内。

 

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