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细胞冻存原理及注意事项

细胞冻存——保存细胞的主要方法

细胞冻存是将细胞置于-196℃液氮中低温保存,这样可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,以便需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件丢失细胞,起到了细胞保种的作用。

细胞冻存及复苏的基本原理是慢冻快融,利用这一原理可以最大限度的保存细胞活力。

冻存的原理——慢冻:主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶,对细胞造成损害;

复苏细胞的原理——快融:主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用,快速使细胞进入复苏和生长状态;

当细胞冷到零度以下,细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。

注意事项:

1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;

2、将冻存管放入液氮灌或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;

3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。

4、取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项特别重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。

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