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液氮保存对瓣膜细胞活性及组织结构影响

目的:液氮保存对瓣膜细胞活性及组织结构影响,为最大限度地保存瓣的生物活性和组织结构完整性提供实验数据。

方法:本实验以6只猪的主动脉瓣和肺动脉瓣为研究对象。每个瓣叶被分成2份,每只动脉瓣提供6个瓣叶片,随机分到6个主动脉瓣或肺动脉瓣组,每组6个瓣叶片(n=6)。6个肺动脉瓣组在含不同抗生素的DMEM液中,于不同温度下浸泡6h或24h。6个主动脉瓣组经抗菌处理,并用速度控制降温容器或-20℃和-80℃的低温冰箱梯度降温后,在液氮中冷冻保存1、3月。应用XTT比色法测定瓣膜细胞活性,并结合光镜、透射电镜。

结果:液氮保存后瓣膜细胞活性明显下降(P<0.05),内皮细胞脱落,成纤维细胞不可逆变性增加,细胞外基质纤维连接蛋白与硫酸软骨素不同程度流失,间质胶原纤维排列紊乱,但胶原横纹结构仍较清晰。冷冻保存1月与3月,结果无显著性差异。速度控制降温容器组的瓣膜细胞活性和细胞超微结构、细胞外基质的完整性均好于-20℃和-80℃的低温冰箱中各过度2小时降温组。再次冷冻保存后,瓣膜活性和组织结构损害进一步加重,在保存液中加青、链霉素对瓣膜活性和组织结构无明显影响。

结论:液氮冷冻保存将损害瓣膜的细胞活性和组织结构完整性,但在冷冻时间<3月时,损害的程度与冻存时间无明显关系;速度控制降温容器可用于同种瓣冷冻保存的梯度降温。冷冻保存的同种瓣一经解冻融化,不宜再次冷冻保存后使用;在保存液中加入青、链霉素并不加重瓣膜的损害。

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