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如何在-196℃液氮罐中复苏细胞

  细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

  一、 实验前准备:

  1、将水浴锅预热至37℃

  2、用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

  3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

  二、取出冻存管:

  1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

  2、从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

  三、迅速解冻:

  1、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

  2、约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

  四、平衡离心:

  用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min

  五、制备细胞悬液:

  1、吸弃上清液。

  2、向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

  六、细胞计数:

  细胞浓度以5×105/ml为宜。

  七、培养细胞:

  将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。

  初学者易犯错误:

  1、水浴锅未预热或者未预热到37℃。

  2、水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。

  3、离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。

  4、一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。

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