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液氮罐在精子活力测定方法中的应用

 

以过滤海水(水温15℃、pH8.1、盐度27%)为激活液(下同),精液与激活液混合后在显微镜下观察精子活力(激活率、活动时间和寿命)。激活率为给定视野中被激活精子的数量占全部精子数量的百分比;运动时间是指精子自激活开始至90%的精子原地颤动为止所经历的时间;精子的寿命指精子从激活开始至90%的精子停止运动的时间。实验重复3次。
稀释液种类对精子超低温冷冻保存效果的影响试验分别以HBSS、MPRS、Cortland液为稀释液(如表一),以10%EG为抗冻剂(抗冻剂为终浓度,下同)配制抗冻液;将精液与抗冻液按1︰3比例混匀,4℃平衡30min;将平衡后的精液-抗冻液混合物分装入0.25mL麦细管中,然后用两步降温法(即将盛精麦细管平放在自制简易降温装置的液氮面上7.5cm处,停留10min后投入液氮中)保存。12h后,将麦细管从液氮中快速取出,于40℃水浴中溶化后检测精子激活率。


稀释比例对精子超低温冷冻保存效果的影响试验以10%EG为抗冻剂、Cortland液为稀释液配制抗冻液,将精液与抗冻液按1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:7、1:9混匀,按前文方法冷冻保存精子及解冻与激活率检测。
抗冻剂种类及浓度对精子超低温冷冻保存效果的影响试验以5%、10%、15%及20%四个浓度的DMSO、Gly、EG、PG为抗冻剂、Cortland液为稀释液配制抗冻液,将精液与抗冻液按1︰3混匀,然后冷冻保存精子及解冻与活力检测。

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