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液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法

怎么样利用液氮保藏菌种?

液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内,将该安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌丝体处于-196℃,其代谢降低到完全停止的状态。

所以不需定期移植。

液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。

具体操作如下:

(1)菌种制备 菌种在PDA培养基平板上于22-24℃下培养10-15天,菌丝体充分生长后,用打孔器(直径2-4毫米)切割琼脂块,或用手术刀片把菌丝培养物切成2毫米X4毫米长方形小块。

(2)安瓶管制备 安瓶管的玻璃,要能经受温度突变而不破裂,容易用火焰熔封管口,恢复培养时容易打开。一般采用硼硅玻璃,管的大小根据需要而定,通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液体的安瓶瓶比较合适。

选好安瓶管后,用印油书写欲保藏的食用菌菌种的菌号于管壁上,160℃干热灭菌,使印记牢固地固定在管壁上。

(3)保护剂 每管加进0.8毫升高压灭菌的10%的甘油水溶液或10%二甲亚讽水溶液可作为冷冻保护剂。

用无菌镊子将这种带有菌丝体的琼脂块移人加有保护剂的安瓶管中。用火焰将安瓶管上部熔封,浸在水中检查有无漏气。

(4)液氮保藏把已做好的安瓶菌种管放人具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一块铁片,使塑料瓶连同安瓶管能一起沉人液氮罐中),盖好瓶盖,在瓶盖上连接一条细绳并作记号,以便提出所需的菌种。把装有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上,使安瓶管缓慢地降温,大约30分钟后,把安瓶管浸人液氮中进行长期保存。

启用液氮罐中保存的菌种时,应先将安瓶瓶置于35-40℃的温水中,使瓶内的冰块迅速融解,然后在无菌条件下开启安瓶瓶,用接种针取菌块移接于适宜的培养基上,置22-24℃活化培养。

 

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