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蝗虫基因组DNA提取及保存方法

1.供试昆虫本试验研究的昆虫样本为亚洲小车蝗(Oedaleusasiaticus)成虫,均采自内蒙古锡林郭勒盟多伦县农牧交错区草原,用养虫笼活体带回实验室进行处理保存。

2.液氮速冻处理取10头活的亚洲小车蝗单头装入离心管中,将离心管放入液氮中速冻处理3min,取出后在室温条件下放置12h观察亚洲小车蝗存活情况。

3.样本保存方法

(1)液氮速冻后保存将采集带回实验室的活体蝗虫样本单头装入离心管中,将离心管放入液氮中速冻处理3min,取出后放入-40℃冰箱中保存备用。

(2)直接冷冻保存将采集带回实验室的活体蝗虫样本单头装入离心管中,直接放入-40℃冰箱中保存备用。

(3)乙醇保存将采集带回实验室的活体蝗虫样本放入无水乙醇(分析纯)中保存备用。

(4)干制标本 将采集带回来的活体亚洲小车蝗样本放入毒瓶中毒死后,针插保存于标本室中,待风干后进行DNA提取试验。

4.DNA的提取将上述4种方法保存的蝗虫样本在3个月后进行DNA提取试验。分别选用单头亚洲小车蝗的后足股节,无水乙醇(分析纯)保存的蝗虫后足股节需在提取之前先用无菌去离子水冲洗2~3次,将蝗虫股节放入研钵中用液氮研磨成粉并移入1.5mL离心管中,然后使用天根dp304动物基因组DNA提取试剂盒参照说明书步骤进行基因组DNA提取。

5.DNA电泳检测用1%的琼脂糖凝胶电泳对提取的蝗虫基因组DNA进行检测。取DNA样品3μL、上样缓冲液2μL混匀后加入凝胶时预留的点样孔中,加入DL2000Marker(TaKaRa;第3条带为150ng/μL),经过100V恒压电泳20min,使用紫外凝胶成像系统观察基因组DNA提取情况并拍照保存。

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