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免疫治疗技术

自体T淋巴细胞免疫治疗已列为正式临床治疗项目,T细胞的体外诱导及免疫治疗技术已趋于成熟,并取得良好的临床疗效,然而成功有效的过继性免疫治疗关键在于获得足量、高活性的免疫效应细胞。有学者认为,免疫治疗成功的关键之一是要获得足够数量和质量良好的T细胞。因肿瘤病人往往免疫系统受抑,细胞免疫功能低下,取自患者的PBMNC

在数量和质量上给体外扩增免疫效应细胞带来了困难,这是目前临床上常见的现象,影响了疗效。另外,免疫细胞需多次输注才能达到较好的治疗效果,多数医疗单位利用血细胞分离机采集单个核细胞,而这种采集方法价格昂贵,多次采集给患者带来心理及身体的痛苦。

在免疫细胞疗法技术成熟的今日,如果能预先储存健康的免疫细胞,在日后有需要时加以应用,不但可以实践疾病预防的概念,更能提升预防医学的价值。PBMNC分离和冻存流程既是一种经济实用的独立操作方法。Ficoll是人工分离淋巴细胞的重要环节,选用高质量的试剂可使细胞分层集中而清晰,能最大程度获取纯净的PBMNC。经深低温长期保存的PBMNC可以保持其原有的活性,其中T淋巴细胞的增殖能力未受明显影响。

有研究结果显示,冻存前细胞活力达到99.6(±0.4%)%,淋巴细胞回收率58.4%(±6.52%),符合临床T细胞的体外诱导及培养的要求。含10%DMSO和右旋糖酐的冻存保护液中分别添加80%无血清培养液和80%自体血浆均显示出良好的冷冻保护效果,在-196℃液氮中保存其2年仍能够保持89.7%±3.82%的活力,为下一步临床择机实施抗肿瘤免疫效应细胞的诱导、扩增以及回输治疗提供了便利条件。建立的自体血浆冷冻保护流程亦适合冻存经诱导、扩增后的免疫效应细胞,证实使用冷冻过的外周血单个核细胞能够定向诱导生成AIL细胞,并且其扩增能力、细胞纯度和细胞毒活性均与新鲜细胞直接诱导生成的AIL细胞没有明显的差别。冷冻的外周血单个核细胞诱导的AIL细胞应用于临床肿瘤治疗提供了基础,可根据肿瘤患者的治疗方案随时复苏细胞,使现有的抗肿瘤免疫治疗方法更加灵活多变。

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