为了对应2015版药典——蜂蜜相关测定，德世科技为您解析液相色谱法检测蜂蜜中各种成分的方法所用仪器耗材。可以帮助广大药物分析者特别是各药检所中药室、中药企业解决在分析检测蜂蜜中遇到的问题。

   2015 版《中国药典》一部中规定了蜂蜜中寡糖、5-羟甲基糠醛、及营养成分果糖、葡萄糖的测定。对余这三项的测定说明如下：

一  寡糖的测定--目前市场出现的假蜂蜜中常添加大量糖浆，含有较多寡糖成分。通过检测蜂蜜样品是否出现寡糖，能快速鉴定掺假蜂蜜。药典规定寡糖的测定采用薄层色谱法，前处理需要用一种特殊的固相萃取小柱，德世科技现已可为客户提供成品固相萃取小柱5010-SPE6252-AC SpecialSPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p，完全满足药典要求。

二  5-羟甲基糠醛--羟甲基糠醛是衡量蜂蜜新鲜度的一项重要指标，其含量越少，表明蜂蜜越新鲜。蜂蜜贮存和加工过程中温度越高，时间越长，产生的羟甲基糠醛就越多，它的含量高，标志蜂蜜贮存环境或加工工艺不合理，或者蜂蜜中有掺假。 5-羟甲基糠醛极性较大，适合用液相色谱柱 5020-89731 InertSustain AQ-C18 5um，4.6*250mm 分析。

三  果糖、葡萄糖—为蜂蜜中的营养成分。药典中推荐使用Prevail Carbohyrate ES 色谱柱，此为聚合物基质氨基液相色谱柱

2015 版药典中对以上三项规定的测定方法如下：

 【检查】

寡糖

取本品2g，置烧杯中，加入10ml 水溶解后，缓缓加至活性炭固相萃取柱（在固相萃取空柱管底部**一个筛板，压紧，置固相萃取装置上。称取硅藻土0.2g，加水适量混匀，用吸管加至固相萃取柱管中，自然沉降形成3μm 厚的硅藻土层，打开真空泵吸引，称取活性炭0.5g 加10ml 水搅拌，混匀，用吸管加入，在真空泵的吸引下使活性炭沉降，当水面接近活性炭层面时，再次注入0.2g 用水混匀的硅藻土（蜂蜜中寡糖测定专用固相萃取小柱：5010-SPE6252-ACSpecial SPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 硅藻土/500mg 活性碳/200mg 硅藻土/6ml，30/p），在真空泵的吸引下，以1 秒/滴的速度用25ml的水预洗，当液面到达柱面上2μm 时关掉**，再压入上筛板，备用）中，打开**，在真空泵的吸引下，使

溶液通过柱子，待液面下降到柱面以上2μm 时，用7%乙醇25ml 洗脱，弃去洗脱液。再用50%乙醇l0ml 洗脱，收集洗脱液，置65℃水浴中减压浓缩至干，残渣加30%乙醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取麦芽五糖对照品，加30%乙醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0512）试验，吸取供试品溶液与对照品溶液各3ml，分别点于同一高效硅胶G 薄层板上，以正丙醇-水-三乙胺（60：30：0.7）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液（取二苯胺1g，苯胺1ml，磷酸5ml，加丙醇至50ml，混匀），加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品相应位置的下方，应不得显斑点。

 5-羟甲基糠醛 照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（液相色谱柱：5020-89731 InertSustainAQ-C18 5um，4.6*250mm）；以乙腈-0.1%甲酸溶液（5：95）为流动相；5-羟甲基糠醛检测波长为284nm，鸟苷检测波长为254nm。理论板数按鸟苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备 取鸟苷对照品适量，精密称定，加10%甲醇制成每1ml 含鸟苷0.2mg 的溶液，即得。另取5-羟甲基糠醛对照品适量，加10%甲醇制成每1ml 含4μg 的溶液，作为定位用。供试品溶液的制备 取本品1g，置烧杯中，精密称定，加10%甲醇适量溶解，并分次转移至50ml 量瓶中，精密加入鸟苷对照品溶液1ml，加10%甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；另取鸟苷对照品溶液，5-羟甲基糠醛对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用以确定供试品色谱中5-羟甲基糠醛及鸟苷的色谱峰；以鸟苷对照品计算含量并乘以校正因子0.340 进行校正，即得。本品含5-羟甲基糠醛，不得过0.004%。蔗糖和麦芽糖照〔含量测定〕项下方法测定，分别计算含量。本品含蔗糖和麦芽糖分别不得过5.0%。

液相色谱仪配置

P230II梯度HPLC系统     北京德世科技

单系统基本配置：

⑴ P230II高压恒流输液泵

⑵ UV230II型紫外可变波长检测器

⑶ Rheodyne 7725i 高压六通进样阀

⑷ ZJ-1阀及色谱柱支架

⑸ TD-1-15梯度混合器

⑺ EC2006色谱处理系统软件（不含打印机、计算机）

⑻ P230II梯度系统启动包

 【果糖、葡萄糖含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验 以Prevail Carbohyrate ES（聚合物基质液相色谱柱：SHO-F7630001 Asahipak NH2P-50 4E 250MMx4.6MM）为色谱柱，以乙腈-水（75：25）为流动相；示差折光检测器检测。理论板数按果糖峰计算应不低于2000。标准曲线的制备 分别精密称取果糖对照品1.0g，葡萄糖对照品0.8g，置同一具塞锥形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，摇匀，作为果糖、葡萄糖对照品储备液。另精密称取蔗糖对照品0.2g，麦芽糖对照品0.2g，置同一具塞锥形瓶中，精密加入40%乙腈10ml，溶解，摇匀，作为蔗糖、麦芽糖对照品储备液。分别精密量取果糖、葡萄糖对照品储备液和蔗糖、麦芽糖对照品储备液，加40%乙腈配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖混合对照品溶液。每一浓度溶液配制中，储备液的用量和稀释体积见2015 版药典P360。精密吸取混合对照品溶液各15μl，注入液相色谱仪，分别测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积值为纵

坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。供试品溶液的制备 取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 精密量取供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，测定，按标准曲线法计算含量。

本品含果糖（C6H12O6）和葡萄糖（C6H12O6）的总量不得少于60.0%，果糖与葡萄糖含量比值不得小于1.0。

液相色谱仪配置 

P230II高压恒流泵      北京德世科技

1） 双柱塞往复串联泵

2） 流量范围：0.001mL/min-9.999mL/min, 设定步长：0.001mL/min

3） 流量准确度：≤±0.3% (1.000ml/min, H2O,室温,8.5MPa)

4） 流量稳定性：RSD≤0.1% (1.000ml/min, H2O,室温,8.5MPa)

5） 最高工作压力：42MPa(0.001mL/min—5.000mL/min)

20MPa(5.001mL/min—9.999mL/min)

6） 显示压力误差：≤±3.0%

7） 压力脉动：≤1.0%

8） 电源：AC 110V/220V, 50Hz/60Hz

9） 功耗：180W

10） 外形尺寸（长×宽×高）：420mm×280mm×175mm

11） 流量准确度校正

12） 内外控互换模式

13） Psi,Mpa,bar压力单位显示任选

RI-201H示差折光检测器（原装进口）

Rheodyne7725i高压进样阀

A/D适配器

ZJ-1阀及色谱柱安装支架

P230配RI-201H示差折光检测器启动包

所用耗材

北京德世科技有限公司  提供2015版药典 蜂蜜检测液相色谱 仪器设备及耗材相关产品 010-80204245   13718238054