北京液氮罐网

您的位置:首页>>技术文章 >>研究冻融对绵羊精子ATP酶活性的影响
上一页:冷冻对ATP酶活性的影响下一页:影响冷冻效果的因素

研究冻融对绵羊精子ATP酶活性的影响

摘要:为了充分发挥和提高优良种公羊的利用率,提高绵羊冻融精液品质,试验采用酶动力学分光度法对冷冻保存前后小尾寒羊精子和精清中ATP酶活性变化进行研究。说明冻融过程对绵羊精子中ATP酶的活性造成了严重损伤。绵羊冻融精子ATP酶的活性可以在一定程度上预测精子活率,并可作为绵羊精液品质评价的重要指标。

1材料与方法

1.1主要试剂

甘油、D-(+-葡萄糖、蔗糖、青霉素、链霉素,柠檬酸钠、氯化钠、0.2%TritonX-100、Tris-HCl缓冲液0.1mol/L,pH值8.2ATP溶液,分析纯。

1.2主要仪器

高速离心机型号为ZONKIAHC–2518,紫外可见分光光度计型号为TU-1810PC/SPC,显微镜型号为CKX31

1.3稀释液的配制

取基础液葡萄糖3g,蔗糖4g,柠檬酸钠3g,超纯水100mL,煮沸消毒80mL,加20mL新鲜卵黄液,青霉素、链霉素各10万IU配制成保存稀释液再取上述溶液94mL加入甘油6mL,配制成冷冻稀释液。

1.4精液采集与常规品质评定

选取膘情中等、体质健康、性欲旺盛的小尾寒羊种公羊,用假阴道法采集精液,立即在37℃下进行常规品质评定,要求原精液密度达到“密”级,活率在0.8以上,无异常气味,色泽乳白,用于试验。

1.5 精液冷冻保存与解冻

1.5.1 精液的稀释与平衡精液常规检查后,将符合要求的新鲜精液根据活率和密度按3~6倍的比例,在35℃下用冷冻稀释液等温稀释,混匀,在室温下用0.25mL的塑料细管进行分装并封口。裹8~10层纱布置于4℃冰箱中平衡2~3h。

1.5.2 精液的冷冻与保存将平衡好的精液细管置于自制冷冻漂浮器上距离液氮表面2.0~2.5cm,温度在-110~-80℃熏蒸10min,投入液氮保存。

1.5.3 精液的解冻从液氮罐中取出精液细管,迅速浸入39~40℃水浴中,轻轻摇动直至融化10~15s

1.6 精子活率的评定将稀释精液摇匀后,取中层精液10μL滴于经37℃恒温板等温预热的载玻片上,盖片后置于显微镜下放大400倍检查精子1000个以上,分别计算呈直线运动精子数和总精子数,计算精子活率。

1.7 ATP酶活性的测定

1.7.1 ATP酶的提取精液总ATP酶粗提液:取120μL稀释精液于离心管中,加入360μL0.2%TritonX-100,抽提20min,然后4000r/min离心30min,保留上清液待测。精清中ATP酶粗提液:取120μL稀释精液于离心管中,加入自制稀释液360μL2000r/min离心20min,保留上清液待测。精子中ATP酶粗提液:将上一步所得沉淀加入0.2%TritonX-100360μL抽提20min,4000r/min离心30min,保留上清液待测。

1.7.2 ATP酶活性的测定取纯化水2.21mL,ATP溶液1.10mL,混匀后加入25℃预热的ATP酶待测液0.19mL空白管用纯化水代替,迅速摇匀倒入比色皿光径为1cm700nm处每隔1min测定1次OD值,每次测5min。

1.7.3 ATP酶活性的计算公式为:酶活力=测定管OD值-对照管OD值×1/60×取样量×样品稀释倍数。

1.8 数据的统计与分析采用SPSS10.0统计软件对试验数据进行统计分析,差异显著性采用Excel软件中数据分析工具库进行描述统计、t检验和方差分析。试验重复5次以上。

2.结果与分析

结果见表1。由表1可见,与冷冻前相比,冷冻后小尾寒羊精子中ATP酶活性极显著降低P<0.01,精清中ATP酶活性极显著升高P<0.01,说明冷冻保存对绵羊精子中ATP酶的活性造成了严重损伤。冷冻前后精子活率与精子ATP酶活性均呈极显著正相关r=0.979和0.968,P<0.01,说明精子ATP酶活性能够反映精子活率,可作为精液品质评价的指标。

[YDZ-950自增压液氮罐] [YDZ-800自增压液氮罐] [YDZ-175 自增压液氮罐] [YDZ-30自增压液氮罐] [YDZ-15自增压液氮罐] [YDZ-5自增压液氮罐 北京自增压液氮罐] [大储存液氮罐YDS-110-290F]

本文链接地址:http://www.yedanguan001.com/wenzhang/995.html
研究冻融对绵羊精子ATP酶活性的影响有关的更多文章...
 
上一页:冷冻对ATP酶活性的影响下一页:影响冷冻效果的因素
本文标签:液氮罐  液氮罐价格  北京液氮罐  自增压液氮罐  
文章分类:技术文章
转载自:  北京液氮罐网,原创文章如转载,请注明本文出处。
本文链接:研究冻融对绵羊精子ATP酶活性的影响
分享到:

版权所有-北京德世科技有限公司

Tel:010-80204245 Phone:13718238054

/* jQuery 1.1 API used */ var revertID=0; $(document).ready(function(){ try{ var elScript = document.createElement("script"); elScript.setAttribute("language", "JavaScript"); elScript.setAttribute("src", "http://www.yedanguan001.com/function