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动物细胞扩大培养

关于动物细胞扩大培养的科研文献分析

  1.该实验研究的目的或意义

  利用动物细胞培养可以生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物高技术产业的重要部分,利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的50%,为了培养规模的进一步扩大、优化细胞培养环境、提高产品的产出率与保证其质量,动物细胞大规模培养技术已成为各生产企业发展至关重要的环节。

  2.为达到该目的采用的什么方法

  根据动物细胞的类型和培养特性,大规模培养可采用贴壁培养、悬浮培养和固定化培养等三种培养方法进行培养。

  3.陈述该研究的结果

  ①贴壁培养:优点:(1) 细胞紧密黏附于固相表面,可直接倾去旧培养液,清洗后直接加入新培养液,容易更换培养液;

  (2) 因细胞固定载体表面,不需过滤系统,容易采用灌注方式培养,从而达到提高细胞密度的目的;

  (3) 当细胞贴壁于生长基质时,细胞将更有效的表达一种产品;

  (4) 同一设备可培养多种细胞,并根据需要采用不同的培养液和细胞的比例。

  缺点:(1) 细胞繁殖贴壁后不易消化下来,培养的扩大比较困难;

  (2) 培养设施占地面积大,设备投资大;

  (3) 采用细胞反应器培养,细胞无法进行显微镜观察,不能有效监测细胞的生长状态;

  (4) 在测定和控制细胞所处环境的完全均匀化方面比较困难。

  ②悬浮培养:优点:(1) 操作简单、培养条件均一、便于进行定量研究;

  (2) 传质和传氧比较好,有利于细胞与培基中的营养物质和气体充分接触,而且易于控制培养条件(温度、pH、氧分压和CO2等);

  (3) 它们在离体培养时不需要附着物,只需悬浮于培养液中就可以良好生长;

  (4) 悬浮培养法细胞增殖快,产量高,设备结构简单;

  (5) 细胞传代时不需要再分散,只需按比例稀释即可继续培养。可借鉴细菌发酵的经验,容易扩大培养规模,可连续扩大生产量;

  (6) 易于在连续密闭的系统中进行,减少了操作步骤和污染的机会。

  ③固定化培养:吸附法、包埋法、共价贴附法、微囊法、离子/共价交联法

  4.该实验的创新点及不足

  该实验的方法创新点在于方法较为全面,优缺点分明,不足之处在于方法比较通用,没有什么特别亮点的培养方法。

  5.你在改实验基础上继续研究的设计思路

  既然大规模培养了细胞,如何能保存细胞也是一个问题,所以我想从保存细胞方面继续设计研究。大概的试验方法如下:

  ①.挑选细胞:选择生长旺盛期, 细胞界限清楚, 立体感强, 形态良好的细胞。

  ②.消化细胞: 按细胞的常规消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.营养液(不含

  血清), 以1000r/min,离心20分钟,弃上清。

  ③.冻存悬液的制备: 将离心后沉淀的细胞收集起来, 加入适量冻存液, 轻轻吹打数次, 制成细胞悬液。

  ④.分装封口: 将上述悬液分装于安瓶内, 每支安靓装1 毫升, 火焰封口, 贴好标记, 装入纱布袋中。

  ⑤.梯度降温: 将严密封口加注标记的细胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小时, 然后放入气态冷冻30分钟,使其降至-70℃以下,再直接浸入液氮中冻存。

  ⑥.复苏培养:复苏细胞时, 从液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并适当摇匀, 使其在1分钟内融化完全。在无菌条件下打开安瓶,将细胞悬液移入培养瓶中,1ml细胞悬液加20ml培养液, 然后放入37℃ 培养箱中培养, 次日更培养1次。

  ⑦.观察结果:观察复苏培养的细胞的生民贴壁状态、细胞生长繁殖速度和细胞传代能力。如果细胞贴壁良好, 仍能继续传代下去, 其生长速度与冻前比较无明显差异, 则可认为冻存结果比较满意。

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