RNA提取过程的关键是建立一个无RNase的实验环境，因此在整个过程中要防止RNase的污染。应注意以下几点：

1、液氮

  由于提取RNA需要活体组织，而在大批量提取RNA时就需要液氮固定RNA，以赢取保存时间。

  使用液氮应注意：

1）、准备冻存管、冻存盒放置需液氮中保存的样品。

2）、液氮中有三个取液氮容器，不宜直接将冻存管放于液氮罐中，这样会使冻存管漂浮起来。固可用纱布、棉线将取氮容器口封住，保存样品。

3）、取样品时，需要使用研钵。研钵在使用前，需清洗，并用纯酒精灼烧以充分灭菌。在研磨液氮保存的样品时，需加入液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨。如此三次。可用消毒过的钥匙将研钵中的组织样品转入EP管中。介于所取的样品不能完全转移到EP管中，故而在取样时需多取样品，以免不够。

4）、新买的液氮罐需用一定液氮进行清洗与预冷。固相对于10升液氮罐第一次需定15升液氮。液氮可有效保存样品半个月。

2、无RNase实验条件的建立

1)       用盛有70%酒精的喷壶清理实验台、超净工作台、低温离心机及操作范围内所有区域以保证没有污染，在实验过程中也需要不断的用70%酒精清理。

2)       实验过程中所用的剪刀、镊子、研磨棒等需要高温灭菌，并在烘箱中高温烘烤6小时以上。紫外灯照射。

3)       实验所用的一次性枪头、大小EP管、研磨棒、需要现用现灭。

4)       配带一次性口罩，尽量避免说话。

5)       取液器是RNase的一个重要污染源，一般采用酒精擦洗取液器的内部和外部。

6)       操作过程中保证强风，操作间隙需不断进行紫外灭菌。

3、快速提取RNA注意事项

1）、用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活。

2）、提取RNA中所用的75%乙醇、氯仿、异丙醇、枪头、EP管需提前预冷。低温离心机需提前打开四度预冷。

3）、低温离心机只有12个孔，故而每次只能提取12管的样品，切勿多取。

4）、预先将实验所用的EP管进行标号预冷，再紫外照射。

5）、提取好的RNA要求为室温静置一个小时以保证充分溶解，但事实上一般都在冰盒或四度溶解20分钟，以避免RNA讲解。

6）、反转录过程中需提前计算MIX所需各个试剂的用量，MIX可比所需用量多配两管甚至多管，在分装时不宜完全按下枪以保证足够用量。

7）、RNA inhibitor、M-MLV 如若看似不够，需稍稍离心后再操作。

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