东亚牌 YDS-50B-200F 液氮罐操作规程

一、设备概述

二、使用前准备

1. 环境检查
   • 选择通风良好、干燥阴凉的场地，环境温度控制在 5-25℃，远离热源（如暖气、烘箱）及易燃物。
   • 罐体需水平放置，底部用防滑垫固定，周围预留 30cm 操作空间，多罐存放时间距≥50cm。
   • 安装氧气浓度报警器（阈值 19.5%），避免氮气积聚导致窒息。
2. 设备状态确认
   • 外观检查：罐体无凹陷、焊缝无开裂，真空排气口完好。若罐壁大面积结霜或发烫，提示真空层失效，需立即停用。
   • 阀门测试：缓慢旋转进 / 排液阀、增压阀、放空阀，确保无卡滞或泄漏。安全阀需定期校验，整定压力 0.09MPa。
   • 配件检查：提筒、冻存架无变形，液位计（若配备）刻度清晰，耐低温标签及防护装备齐全。
3. 防护装备穿戴
   • 必须佩戴耐低温液氮手套（禁用棉质）、全封闭护目镜及长袖实验服，防止冻伤和液氮飞溅。

三、核心操作流程

1. 液氮填充
   • 充液：打开放空阀排空内胆空气，使用金属漏斗（预冷 1 分钟）沿罐壁缓慢注入液氮，流速≤3L / 分钟。建议注入 10L 预冷 30 分钟，待内胆温度平衡后补至 80% 容量（约 40L），预留气相空间防膨胀溢出。
   • 日常补液：通过液位尺或称重法监测，当液位低于总容量 30% 时需补充液氮。补液前关闭增压阀，打开放空阀泄压至压力表归零。
2. 自增压输液
   • 压力调节：关闭放空阀，缓慢打开增压阀，观察压力表。当压力升至 0.05MPa 时，打开排液阀即可连续输液。输液过程中若外筒局部结霜属正常现象，关闭增压阀后霜层会自然消退。
   • 输液结束：依次关闭增压阀、排液阀，打开放空阀泄压，并用干燥氮气吹扫管道防冰堵。
3. 样本存取
   • 快速操作：单次开盖时间≤1 分钟，提筒取出后需置于专用支架，避免直接接触常温表面导致样本升温。
   • 液相存储：样本需完全浸没于液氮中，气相存储温度控制在 - 150~-190℃，防止样本污染。
   • 冻存管处理：从液氮中取出后立即置入 37℃水浴快速解冻（≤2 分钟），1 分钟内转移至培养基稀释以降低 DMSO 毒性。

四、维护保养规范

1. 日常巡检
   • 每日记录液位高度及环境温度，若日蒸发量突增 50% 以上，需排查阀门密封性或真空度。
   • 检查提筒提手、密封圈等易损件，发现老化或变形及时更换。
2. 定期清洁
   • 内胆清洗：每 3 个月排空液氮，待罐体恢复室温后，用 30-40℃中性洗涤剂擦拭内胆，蒸馏水冲洗后倒置晾干。严禁使用硬物刮擦，防止破坏真空层。
   • 阀门维护：每月用无水乙醇清洁阀杆，涂抹少量硅脂保持润滑，避免冰粒堵塞。
3. 长期停用处理
   • 排空剩余液氮，用干燥氮气吹扫内胆，关闭所有阀门并拧松密封盖（保持通风），存放于干燥阴凉处。重新启用前需检测真空度，静置 24 小时无结霜方可使用。

五、安全注意事项

1. 风险防控
   • 禁止在密闭空间操作，避免明火及静电产生。
   • 液氮泄漏时，立即撤离至通风处，待挥发完毕后用惰性材料吸附残留液体。
   • 皮肤接触液氮后，立即用 40℃温水冲洗 15 分钟，冻伤起泡需就医。
2. 生物安全
   • 传染性样本需单分区存储，使用双人双锁管理，存取记录存档≥5 年。
   • 冻存管需使用耐 - 196℃的聚丙烯材质，标签注明样本名称、日期及操作人员，防止混淆。
   • 若发现液氮浑浊或样本管漂浮，需对该批次进行支原体及细菌检测。

六、应急处理流程

1. 真空层失效
   • 罐体表面结霜面积＞30% 或压力异常升高，立即转移样本至备用罐，联系厂家检修。
2. 阀门故障
   • 若排液阀堵塞，可卸下阀体检修，用 40℃热风融冰后重新安装。安全阀结冰时，需送专业机构校验。
3. 运输事故
   • 车载运输时需固定于专用支架，车速≤30km/h。若罐体倾倒，未破损则待液氮挥发后扶正；若破损需疏散人员并联系专业清理。

七、记录与追溯

• 建立《液氮罐使用日志》，记录每次补液时间、液位高度、样本存取记录及维护操作。
• 自增压功能使用时需记录压力变化及输液量，便于能耗分析。