以过滤海水（水温15℃、pH8.1、盐度27%）为激活液（下同），精液与激活液混合后在显微镜下观察精子活力（激活率、活动时间和寿命）。激活率为给定视野中被激活精子的数量占全部精子数量的百分比；运动时间是指精子自激活开始至90%的精子原地颤动为止所经历的时间；精子的寿命指精子从激活开始至90%的精子停止运动的时间。实验重复3次。
稀释液种类对精子超低温冷冻保存效果的影响试验分别以HBSS、MPRS、Cortland液为稀释液（如表一），以10%EG为抗冻剂（抗冻剂为终浓度，下同）配制抗冻液；将精液与抗冻液按1︰3比例混匀，4℃平衡30min；将平衡后的精液-抗冻液混合物分装入0.25mL麦细管中，然后用两步降温法（即将盛精麦细管平放在自制简易降温装置的液氮面上7.5cm处，停留10min后投入液氮中）保存。12h后，将麦细管从液氮中快速取出，于40℃水浴中溶化后检测精子激活率。

稀释比例对精子超低温冷冻保存效果的影响试验以10%EG为抗冻剂、Cortland液为稀释液配制抗冻液，将精液与抗冻液按1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：7、1：9混匀，按前文方法冷冻保存精子及解冻与激活率检测。
抗冻剂种类及浓度对精子超低温冷冻保存效果的影响试验以5%、10%、15%及20%四个浓度的DMSO、Gly、EG、PG为抗冻剂、Cortland液为稀释液配制抗冻液，将精液与抗冻液按1︰3混匀，然后冷冻保存精子及解冻与活力检测。

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