用冷冻异种骨膜引导兔桡骨骨组织再生的可行性实验的材料与方法(下)-北京班德液氮罐

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用冷冻异种骨膜引导兔桡骨骨组织再生的可行性实验的材料与方法(下)

五、动物模型的建立:
l、术前手术室常规消毒。将冷冻异种骨膜置于无菌生理盐水中浸泡30分钟备X 16mm大小,两侧卷曲,套于试验组桡骨缺损两断端处,远、近端各套入3-4mm。将膜用可吸收线缝合成管状并与两端骨膜或软组织缝合固定,形成密闭的空腔,依次对应缝合皮肤切口。对照侧不包绕移植膜,彻底止血后,对应缝合皮肤切口。
3、术后双侧前肢不予外固定,因完整尺骨可以起到固定作用。分笼饲养,自由活动,标准动物饲料喂养,洁净饮水。室温保持于15.20"C,每同紫外线消毒。术后抗生素处理,每只肌注庆大霉素4万单位,每天1次,连续5天。


六、分组
按自身同期对照研究的设计原则,每只新西兰大白兔双前肢随机分为实验侧和对照侧,均造成双侧桡骨干中段10mm的骨缺损,连同骨断端两侧3--5mm的骨膜一并切除。实验侧骨缺损处包绕经处理的冷冻异种骨膜,对照侧骨缺损处(己破坏骨膜)不包绕冷冻异种骨膜,作为空白对照。


七、评价指标及取材情况
 

(一)X线观察:
术后第2、4、6、8周随机取10只新西兰大白兔为X线观察组,行双侧尺桡骨干摄片,术后第12周剩余的10只大白兔全部行摄片,观察骨痂生长情况,骨膜反应及骨塑形情况,统计愈合率。
 

(二)取材情况:
术后2、4、6、8、12周随机分批处死动物,每批5只,最后10只行愈合率评估,将双侧桡骨取下,取材部位为膜中央部、交接部、周围软组织部,行大体标本观察及组织学检查,30只新西兰兔全部进入结果分析。
 

(三)大体标本观察:
在手术解剖处死的新西兰大白兔时肉眼仔细观察组织结构变化,包括缺损内骨痂分布情况,塑形特点,膜的位置、形状等特点。
 

(四)组织学观察:
将取材组织冲净血液,Formical.4脱钙液脱钙5.7天,脱钙满意后,用10%福尔马林液固定,乙醇梯度脱水,二甲苯透明,浸蜡,纵向石蜡包埋5um厚,沿纵轴连续切片,HE染色。光镜和电镜下观察膜中央部、交接部、周围软组织部的组织学变化,以及皮质骨的重建变化。
 

(五)骨生物力学测定:
将兔桡骨置于三点弯曲央具,两下支点距离为30mm,上头以55mm&min.的速率加载,形变TSC、3光栅线位移传感器测量的精度为0.02mm。计算机自动采集和处理载荷%桡度曲线,采集频率30Hz,测力精度为3。
 

(六)术后12周兔桡骨骨缺损愈合率评估。

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