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驴精液的低温冷冻保存技术

摘要:驴精液的低温冷冻保存技术及应用源于20世纪60年代末,且发展非常缓慢。

近年来驴精液低温冷冻过程中所用到的单层密度梯度离心法、稀释液配方以及人工授精技术等对母驴(马)受胎率的影响,在为驴精液冷冻保存技术和提高其受胎率的研究提供科学参考。

冷冻精液配种具有高效利用优良种公畜,不受时间与地域限制,不受种公畜生命限制等优势。牛的冷冻精液是研究最早且最成功的,而驴的冷冻精液还处在试验研究阶段。据报道,用种公驴冷冻精液配2匹母马,受胎1匹;而国内最早的相关研究是在1973年,易理辉等研究发现,驴冷冻精液配母马的平均情期受胎率为52.3%,达到鲜精水平,填补了我国驴精液冷冻的空白。

驴精液的低温冷冻保存技术分析

1.鲜精离心方法(单层密度梯度离心法)马、驴精液不同于牛,其精子密度较低,一般为2×108~3×108个/mL,精液中大部分的物质为精清,精清可为精子提供营养物质,并促进精子成熟;但是体外保存精液时,由于精清中具有促使精子提前获能的物质,会缩短精子体外存活时间。因此,驴精液冷冻保存时需要将精液离心,去除大量精清。目前,一般采用

22℃下离心力400~600g离心10~15min的常规离心法。近年来,研究者们正在探索更高效的离心方法,如单层密度梯度离心法(SLC)。

单层密度梯度离心法是将样品加入到惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。研究表明,使用该方法离心公马精液可以获得更好的精子活力、质膜完整性及 DNA 完整性等,从而提高其受孕能力。受此启示,2012 年至今,I.Ortiz 等一直致力于驴精液单层密度梯度离心法的研究,并发现在进行离心处理前向精液中加入Equipure TM或Androcoll-E-Large,尤其是后者,可以大大改善驴冷冻精液的运动参数、生存能力及细胞形态等,下一步将探索该方法是否可以提高母驴受胎率。

2.稀释液配方

稀释液一般包括基础稀释液和冷冻稀释液,其配方须满足以下条件:

(1)、对精子无毒害作用;

(2)、能供给精子营养;

(3)、酸碱环境适合精子生存;

(4)、渗透压适当;

(5)、原料价格合适、配制方便。配方成分一般含有葡萄糖、卵黄、甘油、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、青霉素、链霉素等。按功能可分为营养供给剂、低温保护剂、冷冻保护剂、pH值缓冲剂、抗生素等。

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