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酶洗法制备兔组织工程气管支架研究的材料与方法

 

1、实验材料
健康新西兰白兔购自中国人民解放军第四军医大学实验动物中卜 脱氧胆酸钠购自北京奥博星生物技术有限责任公司 脱氧核糖核酸酶-#(Dnase-#)购自德国R。che公司 两性霉素B购自美国Amresc。公司。 蔡司正置显微镜Axi。sk。p 40 购自德国ZEISS 公司 钨灯丝扫描电镜VEGA3 LMH购自捷克Tescan 公司 电子实验机购自日本Shimaczu 公司。

2、实验方法
8.67实验动物分组7健康新西兰兔24 只 雌雄不限 体重2.5 ~3.0kg。 将其随机等分为4 组 每组6只。 A组是对照组 行新鲜气管检测3 B\C\D是实验组 分别进行深低温冷冻法\酶洗法\深低温冷冻-酶洗法处理。

8.87气管支架的制备7深低温冷冻法[2 -3]制备B组气管支架: 耳缘静脉空气栓塞致死 无菌条件下取出气管 迅速剥离气管上的疏松结缔组织。 经生理盐水冲洗 并在20 万U/L青霉素\200mg/L庆大霉素溶液中浸泡3min 后 将气管放入无菌生物袋中 然后将气管浸泡于冷冻保护液中 置于4C冰箱冷平衡20min 再于程序降温仪的冷冻箱中程序降温 降温速率-lC/min 至-80C后投入-l96C液氮冷冻6 ~8 周。 检测前将冷冻袋从液氮中取出 置于37C恒温水浴箱内 轻轻摇动 使气管段均匀快速解冻复温。酶洗法[4 -5]制备C组气管支架: 无菌条件下迅速剥离气管的疏松结缔组织 然后将气管在含有l%青霉素\l%两性霉素B的磷酸缓冲液(PBS)中冲洗3min 置入4 C纯净水中浸泡48h 后 将气管在含有4%去氧胆酸钠生理盐水中浸泡3h 然后在含有Dnase-I2 000KU/L的生理盐水中浸泡3h 如此循环3 个周期 然后浸泡在4 C的PBS 溶液中准备检测。

深低温冷冻-酶洗法制备D组气管支架: 气管支架前期处理同B组气管支架 至-80C后投入-l96C液氮冷冻6 周。 冷冻后将气管在含有4%去氧胆酸钠生理盐水中浸泡3h 再在含有Dnase-I2 000KU/L的生理盐水中浸泡3h 然后浸泡在4 C的PBS 溶液中准备检测。

 

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