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液氮保存攻击菌解决的问题

 

用原来的传代法制备的攻击菌不但菌种的消费大,而且因传代培养基的不同而各批间的效价检测结果会有差异。而液氮保存攻击菌解决了以上的问题。

试验表明,将攻击菌复苏、传代(3~9代)、分装并保存在液氮中,攻击菌仍然保持原有的生物学特性,符合《中华人民共和国药典》〔2〕中攻击菌的LD50为100~1000 /MLD的要求,可用于无细胞百日咳效力检定。且有较好的稳定性,该法制备的攻击菌用于检定可减少人力、物力并节省时间,降低生产成本,提高工作效率,并能使每批的检定结果不因攻击菌的变化而受影响。因同批制备的攻击菌支间差异不显著,从而更能准确地反映制品的真实效价结果。

在攻击菌制备过程中,通过多次反复试验取得了一些经验,现表述如下:

①在制备过程中攻击菌的浓度测定非常重要,制备过程严格控制不受污染,而且必须纯菌检查合格;

②要注意在放入液氮前,一定要先缓冻,慢速冷却会有充分的时间使细胞内的水分向外渗出达到平衡,快速冷却没有充分的时间使细胞内的水分向外渗出、脱水,加速细胞内冰晶增大,使细胞处于损伤状态或潜在的损伤状态;

③快速加温融化不会在解冻过程中其冰晶损伤细胞〔3〕,因此解冻时一般在3分钟左右为宜。在生产实践中需不断积累经验、掌握操作技能,为提高制品质量,在攻击菌的应用上尚有待进一步改进。

 

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